岛津LC10AT型HPLC操作规程长乐

岛津LC-10AT型HPLC操作规程

岛津LC-10AT型HPLC操作规程 2011： 1．目的 规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。2．范围 适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 3．职责 质检员对本规程的实施负责。 4．规程 4.1系统组成：本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。 4.2准备 4.2.1准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 4.2.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 4.2.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。 4.2.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 4.3开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 4.4参数设定 4.4.1波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 4.4.2流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 4.4.3流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 4.4.4梯度设定 4.4.4.1在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键； 4.4.4.2用数字键输入时间，按[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键； 4.4.4.3重复上一步设定其它时间步骤； 4.4.4.4用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。按[CE]键退出。 4.5更换流动相并排气泡4.5.1将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；4.5.2逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀； 4.5.3按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止； 4.5.4将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。4.5.5如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 4.5.6如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。4.6平衡系统 4.6.1按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。4.6.2等度洗脱方式 4.6.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。 4.6.2.2检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。 4.6.2.3观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。 4.6.2.4观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 4.6.3梯度洗脱方式 4.6.3.1以检验方法规定的梯度初始条件，按4.6.2项下方法平衡系统。 4.6.3.2在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。 4.7进样 4.7.进样前按检测器[zero]键调零，按软件中[零点校正]按钮校正基线零点，再按一下[查看基线]按钮使其弹起。4.7.2用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

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